Ассоциация инсерционно-делеционного полиморфизма гена ACE с факторами циркулирующего отдела ренин-ангиотензин-альдостероновой системы и функцией эндотелия микрососудов кожи при формировании гестоза

Изучена ассоциация инсерционно-делеционного (I/D) полиморфизма гена ангиотензинпревращающего фермента АСЕ (АПФ) с активностью АПФ, ренина в плазме крови и функцией эндотелия микрососудов кожи при гестозе. Носительство DD-генотипа полиморфизма I/D гена АСЕ при гестозе связано с наименьшей активностью ренина плазмы и эндотелийзависимой вазодилатацией, а наибольшая активность АПФ с аллелем D.

Введение

Гестоз является уникальным заболеванием у беременных с недостаточно изученным патогенезом и связан с крайне неблагоприятными перинатальными и акушерскими исходами. В ответ на локальную ишемию плаценты при аномальной инвазии ворсин хориона запускается механизм системного нарушения функции эндотелия — основного фактора формировании гестоза. Тканевая перфузия находится под влиянием циркулирующих и тканевых компонентов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС). При физиологической беременности уровни ренина и альдостерона прогрессивно увеличиваются при незначительном снижении активности ангиотензинпревращающего фермента (АПФ, АСЕ). Нормальной гестации сопутствует уменьшение тканевой чувствительности к прессорным влияниям ангиотензина II, а нарушение этого механизма лежит в основе эндотелиальной дисфункции. Установлено, что инсерционно-делеционный (I/D) полиморфизм гена АСЕ ассоциирован с риском возникновения гестоза, однако эти закономерности зависят от этнического состава популяции. Количественные признаки фенотипов РААС, патогенетически значимых для гестоза, находятся под влиянием молекулярных вариантовгенов. Однако остается неясным, как влияет I/D-полиморфизм гена АСЕ на уровень факторов циркулирующего отдела РААС и проявление эндотелиальной дисфункции при осложнении беременности гестозом в популяции русских, проживающих на территории Тверской области.

Цель исследования

Цель исследования — изучение ассоциации I/D-полиморфизма гена АСЕ с факторами циркулирующего отдела РААС и функцией эндотелия микрососудов кожи, патогенетически значимыми для формирования гестоза.

Материал и методы

Обследовано 196 беременных из популяции русских, проживающих в Тверской области, из которых 124 — больные гестозом и 72 — здоровые беременные (контрольная группа). Пациентки дали информированное письменное согласие на участие в исследовании, одобренное этическим комитетом Тверской государственной медицинской академии (г. Тверь). Срок гестации 28—38 нед. Средний возраст в группах (27,6 ± 4,3) и (25,7 ± 3,5) года соответственно (p = 0,63). Среднесуточное систолическое артериальное давление (АД) при гестозе составило (132,5 ± 2,7) и (109,8 ± 3,5) мм рт. ст. (p = 0,04), а среднесуточное диастолическое АД — (81,1 ± 1,99) и (65,4 ± 0,9) мм рт. ст. (p = 0,03) у больных и здоровых беременных соответственно.

Для оценки скоростных показателей кровотока в микрососудах кожи использовали постоянноволновую высокочастотную ультразвуковую допплерографию с помощью прибора «Минимакс-Допплер-К» (ООО «СП-Минимакс», Россия). Анализировали показатель Vs — максимальную систолическую скорость крово-тока по кривой максимальной скорости. Для оценки эндотелийзависимой вазодилатации (ЭЗВД) использовали ишемическую пробу.

Для типирования полиморфизма I/D гена АСЕ выделение тотальной геномной ДНК пациенток из 100 мкл цельной венозной крови проводили сорбентным методом с использованием набора Diatom DNA Prep 100 (ООО «Лаборатория „Изоген“», Россия). I/D-полиморфизм Alu-повтора в 16-м интроне (rs4340) гена ACE типировали методом анализа полиморфизма длин амплификационных фрагментов с помощью на-бора реагентов «АмплиКит-ACE» (ООО «АмплиКит», Россия) с детекцией в агарозном геле. Активность АПФ и ренина в плазме крови определяли иммуно-ферментным методом.

Распределение генотипов проверяли на соответствие равновесию Харди—Вайнберга с помощью критерия χ2. Различия по частоте аллелей и генотипов между группами оценены критерием χ2. Риск развития гестоза выражен отношением шансов (ОШ) с 95%-м доверительным интервалом (ДИ). Статистическая значимость различий между группами по средним показателям для непрерывных переменных оценивалась при помощи t-критерия Стьюдента или однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим проведением множественных сравнений, включающих критерии Даннета для равных и неравных дисперсий. Уровень статистической значимости различий установлен при p < 0,05.

Результаты и обсуждение

Распределение генотипов полиморфизма I/D гена АСЕ соответствовало закону Харди—Вайнберга (в группе контроля χ2 = 3,20; df = 1; р = 0,07, среди боль-ных χ2 = 0,04; df = 1; р = 0,85). Исследована ассоциация аллелей и генотипов изучаемого полиморфизма с гестозом (табл. 1).

Частота генотипов и аллелей полиморфизма I/D гена ACE у здоровых и больных гестозом беременных

При расчете доминантной модели наследования (генотип II против генотипов с аллелем D) выяснено, что аллель D полиморфизма I/D гена АСЕ ассоциирован с гестозом, а генотип II связан со снижением риска этого осложнения беременности.

Вместе с тем исследования, проведенные в больших популяциях, установили строгую зависимость между носительством генотипа DD изучаемого полиморфизма и возникновением гестоза. Однако не все авторы подтверждают связь полиморфизма I/D гена АСЕ и риском гестоза, что может быть связано с этническим составом популяции.

Наибольшая активность АПФ у здоровых беременных ассоциирована с генотипом DD, а наименьшие значения отмечены у носителей генотипа II при промежуточных показателях у гетерозигот (генотип ID) (табл. 2).

Активность факторов циркулирующего отдела РААС в зависимости от полиморфизма I/D гена ACE у здоровых и больных гестозом беременных (M ± σ)

Примечание. Здесь и в табл. 3: * — р < 0,05 между здоровыми и больными; ** — между генотипом DD и генотипами с аллелем I; # — между генотипами с аллелем D и генотипом II.

Активность АПФ возрастает при гестозе, а в подгруппах генотипов ID и DD ее значения статистически значимо превысили показатели, полученные в контрольной группе (р < 0,05). Характер распределения показателей активности АПФ в подгруппах генотипов I/D полиморфизма гена АСЕ при гестозе характеризо-вался ассоциацией первого с аллелем D. Активность АПФ в условиях гестоза является лимитирующей для всей РААС и прямо влияет на концентрацию ангиотензина II . Вместе с тем при гестозе образуются аутоиммунные антитела к рецепторам ангиотензина II с большей аффинностью к последним по сравнению с нормальным лигандом. В этой связи аутоиммунный процесс дополняет увеличение уровней АПФ и ангио-тензина II при формировании эндотелиальной дисфункции.

Активность ренина у здоровых беременных во всех подгруппах генотипов I/D-полиморфизма гена АСЕ была выше, чем у больных гестозом (р < 0,05). Считается, что активность ренина в течение нормальной беременности прогрессивно увеличивается, обеспечивая гестационную адаптацию гемодинамики.

Активность ренина у больных гестозом снижается, причем наибольшее уменьшение активности этого фактора ассоциировано с генотипом DD полиморфиз-ма I/D гена АСЕ (p < 0,05). Несмотря на то что при гестозе отмечается депрессия активности ренина плазмы, в плацентарной ткани экспрессия его гена возрастает при реципрокном торможении активности циркулирующего отдела РААС. Установленная зависимость между активностью ренина и АПФ с I/D-полиморфизмом гена АСЕ может быть связана с уровнем ангиотензина II в плазме крови. Концентрация последнего является основным тормозящим фак-тором циркулирующего отдела РААС, а уменьшение активности ренина ассоциируется со снижением скоростных характеристик кровотока в маточных артериях.

Показатели ЭЗВД при проведении ишемической пробы у здоровых беременных были выше, чем при гестозе, а время достижения фоновых скоростей кровотока в постишемическом периоде составило в среднем 4 мин (p < 0,05) (табл. 3). Подобные свойст-ва, характеризующие реактивную гиперемию, связаны с высокой активностью нейрогенных и циркулирующих сосудорасширяющих стимулов на фоне уменьшенной чувствительности кожных сосудов к вазопрессорам при нормальной гестации. Различий показателей тканевой перфузии между подгруппами генотипов I/D-полиморфизма гена АСЕ среди здоровых беременных не установлено. Вместе с тем у здоровых небеременных женщин отмечается выраженная зависимость между активностью АПФ и функцией эндотелия.

Фоновые скорости в микрососудах кожи при гестозе достоверно не различались от таковых у здоровых беременных. Напротив, показатели линейной скорости кровотока на 30-й с, 1, 2 и 3-й мин постишемического периода и ЭЗВД во всех подгруппах генотипов полиморфизма I/D гена АСЕ у больных гестозом оказались достоверно ниже при сравнении со здоровыми беременными (p < 0,05). Вместе с тем продолжительность гиперемии среди больных оказалась вдвое меньше при сравнении с группой контроля и составила 2 мин (p < 0,05). Видимо, в данном случае играет роль повышенная чувствительность эндотелия сосудов к вазопрессорам, которые активнее, чем у здоровых беременных, вызывают ответную вазоконстрикцию, сокращая время реактивной гиперемии. Кроме того, носители DD-генотипа среди больных гестозом показали наименьшие значения ЭЗВД в микрососудах кожи при сравнении с подгруппами других генотипов полиморфизма I/D гена АСЕ (p < 0,05). Известно, что носительство генотипа DD, изучаемого полиморфного маркера, ассоциировано также со снижением пульсационных индексов и в маточно-плацентарных сосудах, что является важнейшим пусковым механизмом развития гестоза.

Значения линейной скорости кровотока и показателей ЭЗВД в микрососудах кожи при ишемической пробе у здоровых и больных гестозом беременных (M ± σ)

Заключение

Таким образом, носительство аллеля D полиморфизма I/D гена АСЕ ассоциировано с развитием гестоза, а генотип II является протективным в отношении этого осложнения беременности в популяции русских, проживающих на территории Тверской области, что, возможно, требует подтверждения в более обширной популяционной выборке. Вместе с тем связь количественных признаков факторов циркулирующего отдела РААС и функции эндотелия микрососудов кожи с полиморфизмом I/D гена АСЕ позволяют утверждать о его важной роли в патогенезе гестоза. Так как супрессия активности ренина и редукция ЭЗВД ассоциированы с генотипом DD, а наибольшая активность АПФ с «аллелем риска» изучаемого полиморфизма.

Однако нужно отметить, что при беременности значительную роль в регуляции системного кровообращения играет тканевой плацентарный отдел РААС, поэтому взаимоотношения обоих отделов этой системы в патогенезе гестоза требуют дальнейшего изучения.